確定色譜峰保留時(shí)間不穩(wěn)定的原因首先需要找出變化的模式。保留時(shí)間在多次進(jìn)樣間隨機(jī)變化。建議首先檢查泵和溶劑混合裝置。校驗(yàn)泵是否工作正常，可以用量筒和秒表來(lái)測(cè)量流速。校驗(yàn)流動(dòng)相組成沒有變化，可以在流動(dòng)相中加入跟蹤劑來(lái)觀察基線的變化。如果流動(dòng)相組成是穩(wěn)定的，基線也應(yīng)該很穩(wěn)定。如果流動(dòng)相組成有變化，你會(huì)觀察到基線的相應(yīng)變化。舉例說(shuō)明，如果你使用反相條件，UV檢測(cè)器，可以在有機(jī)相溶劑中加入0.1%的丙酮，監(jiān)測(cè)254 nm下的基線變化。另一種方法也可以，你需要人工配制流動(dòng)相，然后通過(guò)溶劑混合裝置。如果保留時(shí)間的變化消失了，問題就出在溶劑混合裝置上。

 一天之內(nèi)的進(jìn)樣保留時(shí)間一致，但是不同天數(shù)之間的保留時(shí)間變化

   這種情況下，儀器本身不太可能有問題。保留時(shí)間變化zui有可能的原因是流動(dòng)相組成的變化。在反相色譜中，保留因子k和流動(dòng)相中有機(jī)溶劑的體積含量成指數(shù)關(guān)系。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，如果有機(jī)溶劑含量誤差1%，那么保留時(shí)間的變化在5%到15%之間，典型情況在10%左右。建議仔細(xì)稱量有機(jī)溶劑，的配制流動(dòng)相方法是用質(zhì)量稱量代替體積稱量。

   此外，流動(dòng)相如何脫氣也可能導(dǎo)致保留時(shí)間的變化。的脫氣方法是使用真空超聲脫氣大約一分鐘左右，這會(huì)zui大程度的減少溶劑蒸汽的揮發(fā)。另一個(gè)方法是用氦氣流噴射，在流動(dòng)相被氦氣平衡后，氦氣流必須被關(guān)閉，否則氦氣會(huì)帶走溶劑蒸汽，溶劑的組成會(huì)由于蒸發(fā)而發(fā)生變化。

    如果樣品組成是離子狀態(tài)或者離子化的，那么控制流動(dòng)相的pH值非常重要。小到0.1單位的pH變化會(huì)導(dǎo)致保留時(shí)間漂移10%左右。所以準(zhǔn)確測(cè)量pH值并保證pH儀被很好地的校準(zhǔn)。在反相色譜中，隨著流動(dòng)相pH值的升高，酸保留時(shí)間會(huì)減少，堿的保留時(shí)間會(huì)增加。

色譜峰保留時(shí)間朝同一個(gè)方向漂移

    如果所有色譜峰的保留時(shí)間都朝同一個(gè)方向漂移，很可能是溫度原因所致。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，每℃的變化導(dǎo)致保留時(shí)間變化大約1%到2%左右。在通常情況下沒有什么問題，但是在許多地方空調(diào)和暖氣在周末的時(shí)候會(huì)關(guān)閉，然后會(huì)出現(xiàn)樣品在周末的保留時(shí)間會(huì)和平時(shí)不一樣。使用柱溫箱可以很好的避免這個(gè)問題。